Print this page
Thursday, 13 June 2019 11:22

Изучение бактерицидного и бактериостатического действия теотропина на микроорганизмы различной морфологической структуры

Written by
Rate this item
(0 votes)

В статье дана характеристика препарата теотропина. Описано бактериостатиче- ское и бактерицидное действие теотропина на бактерии видов Listeria monocytogenes, Ornithobacterium rhinotracheale, Staphylococcus aureus. Эмпирическим путем подо- браны дозы препарата, временные экспозиции для полной инактивации вышеназванных ми- кроорганизмов.

Ключевые слова: теотропин, бактериостатическое и бактерицидное действие,

Listeria monocytogenes, Ornithobacterium rhinotracheale, Staphylococcus aureus

Введение

Изучение антибактериальных и анти- вирусных свойств соединений различных классов, с целью разработки новых неток- сичных, высокоэффективных, экологически безопасных консервантов и инактиваторов для изготовления биопрепаратов представ- ляет собой весьма актуальную задачу со- временной биотехнологии [2,4,6].

Инактивирование с целью получения антигена для вакцин из убитых штаммов микроорганизмов в то же время должно со-

хранить иммуногенные структуры возбуди- теля в возможно более неизмененном виде. Поэтому прикладные исследования в раз- работке инактивированных вакцин направ- лены прежде всего на постоянный поиск

«идеального» способа инактивации.

для решения этой проблемы необхо- димо изыскание оптимальных средств и методов, которые бы необратимо повреж- дали имеющиеся в нуклеиновых кислотах возбудителя структуры и информации, от- ветственные за размножение, но оставляли

контактными антигенные структуры белко- во-полисахаридных молекул, ответствен- ных за иммуногенность [1,3,7].

Применяемые для этой цели хими- ческие соединения типа формальдегида обладают остаточным действием, которое приходится устранять дополнительными реактивами, что усложняет технологию из- готовления вакцинных биопрепаратов.

теотропин – стабильное при хранении и нагревании вещество (плавится без раз- ложения при температуре 194-196°с, стаби- лен при хранении в сухом виде и темпера- туре не выше 40°с в течение не менее 10 лет – срок наблюдения). он представляет собой порошок желтоватого цвета со сла- бым специфическим запахом или без запа- ха в зависимости от степени очистки. Хоро- шо растворим в воде (насыщенный раствор имеет концентрацию свыше 50%), спирте, ацетоне, рн 10 %-ого водного раствора в пределах 9,3-9,5. теотропин не раздражает кожи и слизистых оболочек глаз, дыхатель- ных путей, мочеполовой системы. для при- готовления концентрированных растворов и работы с ними следует использовать рези- новые перчатки, для работы с разбавленны- ми растворами специальных мер предосто- рожности не требуется, кроме предотвра- щения приема внутрь больших количеств раствора. При попадании в глаза их следует промыть водой и раствором борной кисло- ты, поскольку растворы теотропина облада- ют слабощелочным рн [5,8,9].

отсутствие раздражающего и токсиче- ского действия теотропина на организм те- плокровных животных делает его перспек- тивным препаратом как возможного сред- ства для инактивации вакцинных штаммов микроорганизмов.

целью наших исследований являлось изучение бактерицидного и бактериостати- ческого действия теотропина на микроорга- низмы различной морфологической струк- туры при его применении как возможного инактивирующего препарата на производ- ственные штаммы бактерий в технологии изготовления инактивированных вакцин.

Материалы и методы

оборудование: холодильник бытовой, термостат тс-80м-2; микроскопы мБИ-3; центрифуги лабораторные оПн-8УХл4,2 и цлс-3, весы чашечные с разновесами, су-

шильный шкаф, машина для изготовления ватных пробок; водяная баня, колбы мерные емкостью 50, 100, 250, 500, 1000 см3; пипет- ки пастеровские, пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0; 10 см3; флаконы емкостью 50, 100, 200 см3; стекла покровные, стекла предметные, чашки Петри, пробирки, стандарты мутно- сти на 0,5 и 1,0 млрд. микробных клеток, термометры ртутные, фарфоровая ступка с пестиком.

для бактериологического исследова- ния использовали следующие питательные среды и реактивы: мясопептонный бульон (нПо «Питательные среды», г.махачкала), мясо-пептонный агар (Гнц прикладной ми- кробиологии, г. оболенск), желточно-соле- вой агар, глюкоза, теотропин.

Бактериостатическую и бактерицид- ную концентрации теотропина определяли методом их серийных разведений согласно

«методическим указаниям по отбору, ис- пытаниям и оценке антивирусных и анти- бактериальных химиопрепаратов среди со- единений различных химических классов» (москва, 2004), а также «методическим указаниям по определению чувствительно- сти микроорганизмов к антибактериальным препаратам. мУк 4.2.1890-04».

концентрацию препарата теотропина в бактериальных суспензиях доводили до следующих величин: 5 мг/мл; 7,5 мг/мл; 10,0 мг/мл. концентрацию бактерий в 1 мл фи- зиологического раствора доводили до ве- личины 1010 микробных тел по результатам титрования. данная концентрация бактери- альной суспензии не превышает одну дозу инактивированной бактериальной вакцины, что позволяло, при наличии положительных результатов, указать на возможность ис- пользования теотропина в качестве инакти- ватора.

в эксперименте были использованы следующие виды бактерий, имеющие раз- ную морфологию, строение и химический состав клеточной стенки: грамотрицатель- ная палочка - Ornithobacterium rhinotra- cheale, грамположительная палочка Listeria monocytogenes, кокковая культура Staphylo- coccus aureus.

Бактериальную массу нарабатывали на оптимальных для микроорганизмов пита- тельных средах, трёхкратно центрифугиро- вали при 3000 об./мин в течение 30 минут,

освобождая от питательной среды, и дово- дили до указанной концентрации. в полу- ченную бактериальную суспензию добавля- ли раствор препарата теотропина с учётом вышеуказанных его конечных концентра- ций. Посевы микроорганизмов и учет ре- зультатов исследований проводили в соот- ветствии с рекомендациями, указанными в вышеупомянутых методических указаниях.

Результаты исследований

Бактериостатическое действие тео- тропина проверяли методом контрольного высева бактериальных культур, взаимо- действующих с изучаемым препаратом в различные промежутки времени от 1 до 18 часов, с интервалом 1 час, без освобожде- ния их от буферного раствора, содержащего препарат.

Бактерицидную активность теотропи- на определяли методом контрольного вы- сева бактериальной суспензии после осво- бождения её от буферного раствора, содер- жащего препарат, используя те же времен- ные параметры.

методом центрифугирования при 3000 об./мин осаждали бактериальные клетки, надосадок с теотропином удаляли, осадок ресуспендировали в свободном от препара- та физиологическом растворе и центрифу- гировали при вышеуказанных параметрах. данную процедуру повторяли двукратно. После последнего ресуспендирования и часовой экспозиции раствора с бактериями высевали на плотные питательные среды. отсутствие бактериального роста в течение трёх суток наблюдения (при положительном контроле с интактными штаммами) означа- ет, что данная доза препарата при использу- емой экспозиции обладает бактерицидным действием.

результаты исследований свидетель- ствуют, что изучаемый препарат в концен- трации 5,0 и 7,5 мг/мл обладал бактериоста- тическим, но не бактерицидным действием за время экспозиции 18 часов на все штам- мы изученных микроорганизмов (табл. 1-3). Бактериостатический    эффект                                           на штамм Ornithobacterium rhinotracheale на- чинал проявляться при концентрации тео- тропина 5,0 мг/мл через 4 часа, на штаммы Listeria monocytogenes              и                                           Staphylococcus

aureus – через 5 часов.

При концентрации теотропина 7,5 мг/

мл бактериостатическое действие на штамм Ornithobacterium rhinotracheale проявилось через 2 часа, на штаммы Listeria monocyto- genes и Staphylococcus aureus – через 3 часа.

теотропин в концентрации 10,0 мг/мл оказывал бактериостатическое  действие на штамм Ornithobacterium rhinotracheale и Listeria monocytogenes уже через 2 часа, на штаммы и Staphylococcus aureus – через 3 часа.

Бактерицидные свойства теотропина в концентрации раствора 10 мл/г проявились для микроорганизмов вида Ornithobacterium rhinotracheale через 16, а для видов Listeria monocytogenes и Staphylococcus aureus че- рез 18 часов.

Полученные результаты  согласуются с литературными данными разных авторов о более высокой толерантности к физико- химическим воздействиям грамположитель- ных микроорганизмов по сравнению с гра- мотрицательными.

таким образом, в результате прове- дённых исследований нами установлено, что препарат теотропин в дозе 5,0 мг/мл при концентрации бактерий в 1010/мл после 5-ча- совой экспозиции обладает бактериостати- ческим действием по отношению к бактери- альным культурам как грамотрицательных, так и грамположительных микроорганизмов. концентрация препарата 7,5 мг/мл яв- ляется бактериостатической для всех штам-

мов при 3-х часовой экспозиции.

Препарат в концентрации 10,0 мг/мл после 18-ти часовой экспозиции с бактери- альными культурами проявил бактерицид- ность для всех изучаемых микроорганизмов.

Заключение

Полученные данные позволяют ут- верждать, что изучаемый препарат теотро- пин в концентрации 10,0 мг/мл и экспозиции 18 часов можно использовать в качестве ин- гибитора при производстве инактивирован- ных вакцин из штаммов как грамотрицатель- ных, так и грамположительных вегетативных форм микроорганизмов. При условии, что у убитых бактерий будут сохраняться имму- ногенные свойства и отсутствовать отрица- тельное влияние на организм теплокровных животных: иммунодепрессия, токсичность, аллергия и другие свойства, которые учиты- вают при контроле качества изготовленных

Таблица 1 Бактериостатическое и бактерицидное действие теотропина на штамм Ornithobacterium rhino-

tracheale, в зависимости от концентрации раствора и экспозиции.

 

Концентрация тиопентала

Экспозиции (час)

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

5,0 мг/мл

-

-

-

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

7,5 мг/мл

-

-

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

10,0 мг/мл

-

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

+

+

+

«-»- отсутствие бактериостатического и бактерицидного действия

«+» - бактерицидное действие

«±» - бактериостатическое действие

 

Таблица 2 Бактериостатическое и бактерицидное действие теотропина на штамм Listeria monocytogenes,

в зависимости от концентрации раствора и экспозиции.

Концентрация тиопентала

Экспозиция (час)

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

5,0 мг/мл

-

-

-

-

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

7,5 мг/мл

-

-

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

10,0 мг/мл

-

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

+

+

 

«-»- отсутствие бактериостатического и бактерицидного действия

«+» - бактерицидное действие

«±» - бактериостатическое действие

Таблица 3 Бактериостатическое и бактерицидное действие теотропина на штамм Staphylococcus aureus,

в зависимости от концентрации раствора и экспозиции.

Концентрация тиопентала

Экспозиция (час)

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

5,0 мг/мл

-

-

-

-

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

7,5 мг/мл

-

-

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

10,0 мг/мл

-

-

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

±

+

«-»- отсутствие бактериостатического и бактерицидного действия

«+» - бактерицидное действие

«±» - бактериостатическое действие

биопрепаратов.

Библиографический список

  1. аржаков, в.н. дезинфекция и ее место в системе противоэпизоотических мероприятий / в.н.аржаков, н.в. аржаков // БИо - 2003. - №7. – с. 9-21.
  2. власов н.а., васильев д.а., козин а.И. антибиотики и химиопрепараты для борьбы с инфекционными болезнями жи- вотных (новые методы в профилактике и лечении инфекционных болезней) - Улья- новск, 1997. – с.22.
  3. высоцкий, а.Э. Бактерицидная

активность и токсикологическая характе- ристика дезинфицирующего препарата кд/ а.Э.высоцкий // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии: сб. науч. тр. внИИвсГЭ.т.117. – м., 2005. – с.183-195.

  1. высоцкий, а.Э. сравнительная биоцидная активность дезинфектанта

«сандим-д» / а.Э.высоцкий // Проблемы ве- теринарной санитарии, гигиены и экологии: сб. науч. тр. внИИвсГЭ. т.117. – м., 2006.

–с.176-182.

  1. каштанов, а.в. Исследование бактерицидной и дезинфицирующей ак- тивности препарата однохлористый йод /

а.в.каштанов // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии: сб. науч. тр. всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. т.115. –м., 2003. –с.242-249.

  1. костюкова, т.а. Практические аспекты выбора дезсредств / т.а.кострюкова, м.н. ляпин, т.а. малюкова // санитарная охрана территорий государств снГ: пробле- мы биологической безопасности и противо- действия биотерроризму в современных ус- ловиях: материалы VI межгосударственной науч.- практ. конф. государств-участников снГ. – волгоград. - 2005. - с. 249-250.
  2. Попов, н.И. новое дезинфицирую- щее средство Бианол для дезинфекции объ- ектов ветеринарного надзора / н.И.Попов, Г.д.волковской, с.а.мичко // Проблемы ве-

 

теринарной санитарии, гигиены и экологии: сб. науч. трудов всероссийского научно-ис- следовательского института ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. т. 115.-м., 2003. – с. 218-229.

  1. саврилов, м.р. Изыскание средств дезинфекции при сибирской язве / м.р. сав- рилов // Проблемы мониторинга и генодиаг- ностики инфекционных болезней животных: материалы международной научной конфе- ренции молодых ученых, владимир, 2004.- с.175-177.
  2. Шандала, м.Г. новые дезинфек- ционные технологии для профилактики инфекционных болезней / м.Г.Шандала // Эпидемиология и инфекционные болезни. – 2006. - №4. - с.15-17.

УДК 619:578

хАрАкТЕриСТикА БиологичЕСких СВойСТВ БАкТЕриоФАгоВ ВиДА BACILLUS SUBTILIS

Д.А. Васильев, доктор биологических наук, профессор С.Н. Золотухин, доктор биологических наук, профессор И.Н. Хайруллин, доктор ветеринарных наук, профессор Н.А. Феоктистова, кандидат биологических наук, доцент А.И. Калдыркаев, ассистент

М.А. Юдина, аспирант

А.Х. Мустафин, аспирант

ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия» тел. 8(422)55-95-47

This email address is being protected from spambots. You need JavaScript enabled to view it.

 

В статье дана характеристика основных биологических свойств бактериофагов вида Bacillus subtilis (морфология негативных колоний, литическая активность, спектр литиче- ской активности, специфичность действия, температурная устойчивость, устойчивость к хлороформу, изменение литической активности при хранении). На основании изученных свойств были отобраны фаги для конструирования биопрепарата для фагоиндикации и фа- гоидентификации бактерий вида Bacillus subtilis в объектах санитарного надзора.

 

Ключевые слова: бактериофаги, Bacillus subtilis, морфология негативных ко- лоний, литическая активность, спектр литической активности, специфичность действия, температурная устойчивость, устойчивость к хлороформу, изменение литической актив- ности при хранении.

Read 655 times
Super User

At vero eos et odio dignissimos ducimus qui blanditiis praesentium voluptatum

atque corrupti quos dolores et quas molestias excepturi sint.

Latest from Super User